大多数激光扫描系统,如 B&HDCS-120、Zeiss LSM 系列(710、780、880、980)、Leica(SP5、SP8)、Nikon(A1、C1、C2)都使用激光束消隐。光束消隐可以阻止激光在回飞期间(线回飞和帧回飞)的发射,即不直接产生图像的期间。在许多基于激光扫描的 FLIM 案例中,光束消隐会导致 SPCM 软件显示可变的同步率。这令许多用户感到失望,但这通常是正确的行为。
![](https://www.becker-hickl.com/wp-content/uploads/2019/11/SPCM-rate-bars-80-MHz-sync.png)
在 Becker & Hickl DCS-120扫描系统上,光束黑化功能可在 GVD-120 控制面板上打开或关闭。默认情况下,光束黑化应该启用。
![](https://www.becker-hickl.com/wp-content/uploads/2019/05/SPCM-GVD-120-Laser-and-beam-blanking.png)
在Zeiss LSM上,光束遮蔽始终处于打开状态。在使用皮秒脉冲激光器进行 1p 激发的系统上,激光器会定期打开和关闭。如果激光关闭,激光也不会产生 SYNC 信号,因为它没有脉冲。因此,TCSPC 模块上的 SYNC 计数器有时会 “看到 “SYNC 信号(在常规成像期间),有时则 “看不到 “SYNC 信号(在飞返期间)。由于这种开/关过程,显示的 SYNC 速率低于激光器的实际重复速率。因此,光束变黑会导致显示出不同的 SYNC 速率。
例如:如果激光器的重复频率设置为 50 MHz,那么激光器在开启期间将每秒发射 5000 万个脉冲,而在关闭期间则不发射任何脉冲。同步计数器显示的同步率将低于 50 MHz(5e7);在某些情况下,显示的同步率可能低至 25 MHz。
在使用飞秒激光进行 2p 激发的多光子系统中,例如 DCS-120 MP、蔡司 NLO LSM、Jenlab MPTflex 等。SYNC 速率是恒定的,通常约为 80 MHz (8e7)。在这些系统中,激光器不会关闭。如果存在光束消隐功能,通常是通过 AOM 或 Pockels 单元进行光束消隐。