双光子代谢-荧光成像系统同时记录 NAD(P)H 和 FAD 数据

bh 双光子代谢 FLIM 系统使用 TOPTICA FemtoFibre 二向双波长飞秒光纤激光器进行激发，并在两个并行的SPC-150NXTCSPC FLIM 通道中进行检测。扫描和激光控制由 bhDCS-120 MP FLIM 系统完成。通过在 780 nm 和 880 nm 两种激发波长之间快速切换，并利用 TCSPC 模块的复用功能，该系统准同时记录 NAD(P)H 和 FAD 的 FLIM 数据。其中一幅图像在 780 纳米波长下激发，在 420 至 475 纳米波长下检测；另一幅图像在 880 纳米波长下激发，在 480 至 600 纳米波长下检测。第三幅图像为 880 纳米激光波长的 SHG 图像。使用 bh SPCImage NG 进行数据分析时，可获得结合/非结合比率_a1和_a2、振幅加权寿命_tm、组分寿命_t1和 t2_以及荧光-寿命氧化还原比率（FLIRR）a2nadh/_a1fad 的图像。详见《bh TCSPC 手册》第 8 版（2019 年）第 375 至 361 页和第 483 至 503 页。