荧光交叉相关 – FCCS

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Principles

荧光交叉相关(FCCS)

荧光交叉相关或 FCCS 将一个波长区间的强度波动与另一个波长区间的强度波动相关联。主要应用于蛋白质相互作用的研究。通过将不同发射光谱的荧光团附着在不同的蛋白质结构上,并测量强度波动的交叉相关性,可以发现蛋白质是否相互结合。
与单波长 FCS 一样,FCCS 也需要飞升检测体积。荧光信号被分成两个光谱分量,光子由两个探测器检测,并通过两个并行的TCSPC 模块bh DPC-230 相关器的两个通道或连接到单个TCSPC 模块的路由器进行处理。在同时用于FLIM 的系统中,第一种结构是首选,因为它允许系统处理高光子速率,并提供高 FLIM 时间分辨率。光学原理如下图所示。在某些情况下,必须使用第二种激光来激发第二种荧光团。不过,通常可以找到以相同波长激发的荧光团。

左图:采用单光子激发和共焦检测的 FCCS。显微镜上焦平面的针孔抑制了焦平面外的光线,光线被分成两个检测通道。右图:采用双光子激发的 FCS。激发仅发生在激光焦点处,因此无需针孔。

左图:采用单光子激发和共焦检测的 FCCS。显微镜上焦平面的针孔抑制了焦平面外的光线,光线被分成两个检测通道。右图:采用双光子激发的 FCS。激发只发生在激光焦点上,因此不需要针孔。
相关算法与 FCS 算法类似,只是不同通道的光子是相关的。请参见bh TCSPC 手册“荧光相关光谱 “一章。用 DCS-120 共焦 FLIM 系统记录的 FCCS 曲线如下图所示。

左图:附着在 DNA 上的 Atto 488 和 Atto 647N,分子未连接。右图:双链 DNA 部分连接的 Alexa 488 和 Cy5。蓝色和红色:自相关。绿色:交叉相关。

Products

SPCM 数据采集软件

DCS-120 共焦 FLIM 系统

混合型单光子探测器

SPC-150N TCSPC 系列

SPC-130-EMN TCSPC 系列

DPC-230 TCSPC 模块

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