CONTACT US
Principles
荧光交叉相关(FCCS)
荧光交叉相关或 FCCS 将一个波长区间的强度波动与另一个波长区间的强度波动相关联。主要应用于蛋白质相互作用的研究。通过将不同发射光谱的荧光团附着在不同的蛋白质结构上,并测量强度波动的交叉相关性,可以发现蛋白质是否相互结合。
与单波长 FCS 一样,FCCS 也需要飞升检测体积。荧光信号被分成两个光谱分量,光子由两个探测器检测,并通过两个并行的TCSPC 模块、bh DPC-230 相关器的两个通道或连接到单个TCSPC 模块的路由器进行处理。在同时用于FLIM 的系统中,第一种结构是首选,因为它允许系统处理高光子速率,并提供高 FLIM 时间分辨率。光学原理如下图所示。在某些情况下,必须使用第二种激光来激发第二种荧光团。不过,通常可以找到以相同波长激发的荧光团。
左图:采用单光子激发和共焦检测的 FCCS。显微镜上焦平面的针孔抑制了焦平面外的光线,光线被分成两个检测通道。右图:采用双光子激发的 FCS。激发只发生在激光焦点上,因此不需要针孔。
相关算法与 FCS 算法类似,只是不同通道的光子是相关的。请参见bh TCSPC 手册“荧光相关光谱 “一章。用 DCS-120 共焦 FLIM 系统记录的 FCCS 曲线如下图所示。